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本试剂盒适用于从各种抗凝或非抗凝全血样本中提取总蛋白。过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳。如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

• 蛋白酶抑制剂未开盖前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 全血蛋白浓度较高，需进行稀释后用于下游实验。也可不稀释，根据定量浓度调整下游应用上样量。

• 提取液制备：
  每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  【注】
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取300μL全血样品，加入300μL冷的蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡10分钟。
  【注】
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，在4℃静置，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 将离心柱内柱套上套管，将提取液吸入离心柱内柱，在4℃，10000×g条件下离心3～5分钟。
  【注】
  ● 离心柱用于滤除固体颗粒物杂质，对蛋白质无吸附。
  ● 液体可以自由流穿离心柱，注意内柱套上套管后再加入提取液。
  
• 收集套管内液体即得到全血总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  【注】
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
  ● 所得全血蛋白样品为红色。
  ● 根据需要将蛋白样品稀释至所需浓度使用。全血蛋白的浓度极高，需要根据定量情况进行大比例稀释后再进行下游应用。

• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。